PRÁCTICA 8: DETERMINACIÓN CELULAR DE LOS GRUPOS SANGUÍNEOS ABO Y Rh EN TUBO

OBJETIVOS: 

- Determinar los grupos sanguíneos del sistema ABO.

- Determinar el Rh (Ag D).

- Observar la presencia de aglutinación en el tubo y el microscopio.

MATERIAL:

- Gradilla, parafilm, tubo de hemólisis y 6 tubos pequeños.

- Pipeta Pasteur y dispensador de suero fisiológico (SF).

- Micropipeta automática y puntas de plástico desechables.

- Centrífuga y visualizador.

- Portaobjetos, cubreobjetos y microscopio.

REACTIVOS: 

- SF.

- Anti-A

- Anti-B

- Anti-AB (actúa como control)

- Anti-D

- Autocontrol Rh

MUESTRA:

- Sangre anticoagulada

PROCEDIMIENTOS:

Procedimiento 1: LAVADO DE HEMATÍES

1. Poner en un tubo de hemólisis 0,5 ml de sangre-problema.

2. Llenar hasta arriba de SF y tapar con parafilm; agitar para que se mezcle bien la sangre con el SF.

3. Centrifugar durante 5 minutos a 2.500 rpm (revoluciones por minuto).

4. Extraer el sobrenadante con un pipeta Pasteur.

5. Repetir los 3 pasos anteriores 2 veces más.

Procedimiento 2: REALIZACIÓN DE UNA DILUCIÓN DE HEMATÍES AL 5%.

1. Del sedimento de hematíes obtenido del último lavado y centrifugación, coger con una micropipeta 0,1 ml de hematíes y depositarlos en un tubo pequeño.

2. Añadir 1,9 ml de SF.

Procedimiento 3: DETERMINACIÓN CELULAR DE GRUPOS SANGUÍNEOS ABO Y Rh

1. Rotular 5 tubos pequeños con A, B, AB, D, y CD.

2. Depositar en cada uno de ellos 3 o 4 gotas de la dilución de hematíes al 5%.

3. Añadir 3 o 4 gotas de suero anti-A, anti-B, anti-D, y autocontrol Rh en sus tubos correspondientes.

4. Agitar cada uno de los tubos para que se mezclen bien los reactivos con los hematíes.

5. Esperar 2 minutos para observar las reacciones de aglutinación resultantes.

6. Colocar cada uno de los tubos sobre el visualizador y observar la presencia o ausencia de aglutinación.

RESULTADOS:

Se observó aglutinación de los hematíes en el tubo anti-A y anti-D por lo que el grupo sanguíneo es A+ (Rh +)

ERRORES Y FALLOS:

PRÁCTICA 7: DETERMINACIÓN CELULAR DE LOS GRUPOS SANGUÍNEOS ABO Y Rh EN PORTAOBJETOS

OBJETIVOS:

- Determinar el grupo sanguíneo del sistema ABO.

- Determinar el grupo Rh (antígeno [Ag] D).

- Observar la presencia de aglutinación en portaobjetos.

MATERIAL:

- Portaobjetos (o tarjeta blanca), rotulador y pipeta Pasteur.

- Palillos mezcladores y visualizador de aglutinación.

REACTIVOS:

- Anti-A (A)

- Anti-B (B)

- Anti-AB (AB) (actúa como control)

- Anti-D (D)

- Autocontrol Rh (CD)

MUESTRA:

- Sangre anticoagulada

PROCEDIMIENTO:

1. Depositar una gota de cada uno de los sueros anti-A, anti-B, anti-D y control de Rh en sus correspondientes portaobjetos.

2. Situar una pequeña gota de sangre de la muestra- problema junto a cada una de las gotas de los reactivos anteriores.

3. Mezclar ambas gotas sobre el portaobjetos utilizando un palillo mezclador formando un círculo de 2 a 3 cm de diámetro.

4. Hacer oscilar el portaobjetos suavemente hacia adelante, hacia atrás y en círculo durante 2 minutos.

5. Observar la presencia o ausencia de aglutinación en el visualizador.

RESULTADOS:

Aparece presencia de aglutinación solo en anti-D, por lo que el grupo sanguíneo a determinar es 0+

OBSERVACIONES:

- Termostatizar los reactivos a temperatura ambiente durante unos minutos antes de su utilización.

- Esperar 2 minutos para comprobar las posibles reacciones débiles.

- Cambiar de palillo mezclador para cada reactivo.

- Expresar los resultados del sistema Rh con letras para no crear confusiones: Rh positivo (Rh+) <<POS>> y Rh negativo (Rh-) <<NEG>>