PRÁCTICA 1: DETERMINACIÓN DEL HEMATOCRITO (HTO) MEDIANTE MICROMÉTODO

OBJETIVOS:

• Determinar el valor del HTO, que es la relación existente entre el volumen ocupado por los hematíes y el ocupado por la sangre total, expresado en porcentaje (%).
• Valorar el HTO.
• Aplicar el método del microhematocrito.

FUNDAMENTOS:

Se llama hematocrito al volumen que ocupan los hematíes con respecto al volumen total de sangre. Se expresa en %, es decir cm3 o ml de hematíes que hay en 100 cm3 de sangre. Al centrifugar sangre total las partículas pesadas que se depositan en el fondo son los hematíes, sobre estos se depositan partículas mas ligeras como los leucocitos y las plaquetas y por último en la parte superior del tubo se encuentra el plasma. De esta manera, se originan unas bandas de sedimentación observables a simple vista. La lectura debe hacerse sobre la parte superior de los hematíes y evitar el resto de células, sobre todo en caso de aumento de leucocitos y plaquetas.

MATERIAL:

• Capilares heparinizados desechables si es sangre capilar.
• Lancetas.
• En el caso de sangre total anticuagulada con ácido etilendiaminotetraacético (EDTA), utilizar capilares estándar sin anticoagulante y siempre desechables.
• Plastilina.
• Centrífuga de microhematocrito.
• Plantilla de lectura o lector de HTO.
• Papel de celulosa.

Material utilizado

Centrífuga de microhematocrito

MUESTRA:

• Sangre anticoagulada con EDTA o sangre capilar.

PRECAUCIONES:

• No llenar el capilar más de tres cuartas partes.
• Evitar que entre aire en el capilar.
• Realizar siempre la determinación por duplicado.
• Vigilar que la centrífuga esté bien equilibrada cuando se coloquen en ella los capilares.
• El extremo del capilar sellado con plastifica debe quedar en la parte más externa del plato de la centrífuga.

PROCEDIMIENTO:

1. Llenar los 2 tubos capilares con la sangre-problema hasta las tres cuartas partes de su longitud. El llenado se efectúa por capilaridad, y se realiza poniendo en contacto uno de los extremos del capilar con la gota de sangre (cuando se toma sangre capilar), o introduciéndolo en el tubo de sangre-problema (cuando es sangre anticoagulada) e inclinando éste para facilitar su llenado.
2. Limpiar el exterior de los capilares con el papel de celulosa.
3. Sellar el extremo del capilar por el que ha entrado la sangre con plastilina. Para ello se hace penetrar este extremo del capilar en la plastilina. 
4. Colocar los capilares en la centrífuga, debidamente equilibrados, con el extremo sellado por la plastilina en la parte más exterior del plato de la centrífuga, ajustados al borde y adecuadamente encajados en sus surcos.
5. Centrifugar los capilares a unas 12.000 rpm (revoluciones por minuto) durante 5-10 minutos.
6. Al terminar el tiempo de centrifugación, esperar a que la centrífuga pare completamente, después abrir la tapa y sacar los capilares.

RESULTADOS:

LECTURA E INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS

Una vez centrifugados los capilares, se observarán claramente 2 fases: una de color rojo, que corresponde a la fase ocupada por los hematíes, y otra de color amarillento, que corresponde a la fase plasmática; entre ambas está la zona de interfase. Para obtener el valor del HTO se pueden utilizar 2 métodos:

- Mediante plantilla graduada:

1. Hacer coincidir el inicio de la columna de hematíes con la línea 0.
2. Hacer coincidir el final de la columna de plasma con la línea 100.
3. Ambas tienen que coincidir simultáneamente.
4. Observar en qué línea de la plantilla graduada coincide la zona de interfase entre hematíes y plasma.
5. Leer y anotar este dato numérico como valor del HTO para el primer capilar.
6. Proceder de igual forma para el segundo capilar.

- Mediante lector de microhematocrito:

1. Situar el capilar en la ranura del soporte central fijo del lector con la fase de hematíes hacia el punto rojo.
2. Girar el disco central hasta hacer coincidir el inicio de la fase de hematíes con la línea más cercana al punto rojo, que el final de la fase de plasma coincida con la línea más alejada del punto rojo, y que la zona de interfase coincida con la línea central. Todo ello simultáneamente.
3. Observar en la escala inferior el dato numérico central y anotarlo como el valor del HTO.
4. Si los 2 capilares leídos de la sangre- problema tienen valores iguales, se dará ese dato numérico como valor del HTO para esa muestra en porcentaje (%).
5. Si existe una diferencia máximas de un 2 % entre el valor del HTO mayor con respecto al menor, se dará como valor final del HTO la media entre ambos valores.
6. Si existe una diferencia superior al 2 % entre los valores de los 2 capilares, se volverá a repetir la determinación alargando unos minutos más el tiempo de centrifugación. Si la diferencia persiste después de esta segunda determinación, se calculará la media entre ambos capilares y se dará como valor final del HTO.

RESULTADOS FINALES DE LA DETERMINACIÓN REALIZADA Y VALORACIÓN

Con los resultados obtenidos de la muestra-problema se realiza su valoración con respecto a los valores normales del HTO (v.unidad 6).

RESULTADOS OBTENIDOS EN LA PRÁCTICA:

Medimos con la plantilla graduada:
- L1 que corresponde a todo (hematíes y plasma). El resultado es 65 mm.
- L2 que corresponde a los hematíes. El resultado es 35 mm.

Calcular el porcentaje que le corresponde a la columna de eritrocitos, mediante una regla de tres:

Hematocrito (%) = L2/L1 x 100

Dándonos de resultado de volumen de hematíes en sangre un 53´85%.

El color del plasma era amarillento, siendo normal.

RECOGIDA DE MATERIAL:

• Desechar los capilares utilizados y el papel manchado de sangre en el contenedor rígido para residuos del grupo III.
• Ordenar en el lugar correspondiente la plastilina, la plantilla de lectura del HTO o el lector de HTO.
• Limpiar, cerrar y desenchufar.

OBSERVACIONES:

- No despegar el capilar para evitar la formación de burbujas.

- Colocar los dos tubos en posición opuesta una del otro en los surcos radiales del plato de la centrífuga, de forma que el extremo sellado con plastilina quede en la parte exterior.

- Cuando se mida con la regla milimetrada es importante tener en cuenta la plastilina, dejándola fuera y empezando a contar desde ahí.