PRÁCTICA 2: DETERMINACIÓN CUANTITATIVA DE HEMOGLOBINA

OBJETIVO:

Realizar la determinación cuantitativa de la hemoglobina mediante el reactivo de Drabkin.

FUNDAMENTO:

La hemoglobina es una proteína que contiene hierro, otorga el color rojo a la sangre. Se encuentra en los glóbulos rojos y es la encargada del transporte de oxigeno por la sangre desde los pulmones a los tejidos. Si el nivel de hemoglobina aparece por debajo o por encima de los niveles normales puede indicar un problema de salud.

MATERIALES:

• Guantes y bata
• Agua destilada
• Gradilla
• Pipeta de 5 mL
• Micropipeta de 10 uL y puntas amarillas
• Cubetas de 1,0 cm de paso de luz
• Soporte para cubetas
• Tubo de ensayo
• Vaso de desechos

REACTIVOS:

• Sangre venosa con EDTA (tubo con tapón morado)
• Reactivo Drabkin o Hemoglobin CAL
• Ferricianuro de potasio
• Cianuro de potasio
• Dihidrógeno fosfato de potasio

Sangre venosa con EDTA

Hemoglobin CAL (15g/dL)

APARATOS Y EQUIPOS:

• Espectrofotómetro o analizador para lecturas a 540 nm

PROCEDIMIENTO:

1. Preparar los cálculos necesarios para obtener el reactivo (5 mesas de trabajo), dándonos como resultado 20 mL de reactivo, 19,6 mL de agua destilada y 8 gotas de hemoglobina.

Reactivo de trabajo 

2. Pipetear mediante el Método Micro: Verter en 3 tubos de ensayo de plástico: un blanco con 2,5 mL de reactivo de trabajo, 2,5 ml de reactivo de trabajo + 10 uL de patrón en otro tubo y 2,5 de reactivo de trabajo con 10 uL de muestra problema (sangre venosa con EDTA).

3. En tercer lugar incubamos a temperatura ambiente (15-25ºC), durante 3 minutos, posteriormente pasaremos las sustancias a 3 cubetas de espectrofotometría.

4. Leer la absorbancia (A) del calibrador y la muestra, frente al Blanco de reactivo.

Absorbancia del calibrador

Absorbancia de la muestra

RESULTADOS:

La absorbancia del patrón nos da un resultado de 1,037(A)

La absorbancia de la muestra nos da un resultado de 0,357(A)

Mediante la fórmula que nos ofrece el protocolo usado calculamos su transposición a g/dL

(A)muestra - (A)blanco / (A)patrón - (A)blanco x 15 

El resultado nos da 0,357/1,037 x15 = 5,16 g/dL

Los valores de referencia para una mujer son entre 12-16 g/dL (siendo la muestra utilizada de una mujer). 

ERRORES Y FALLOS:

- Hemos realizado el procedimiento bien, pero al no obtener el resultado entre los valores de referencia, realizando la fórmula del protocolo, podríamos pensar que el patrón no ha sido bien medido o no se ha procedido a una buena agitación antes de su medida.

OBSERVACIONES:

- Encender el espectrofotómetro 15 minutos antes de comenzar la práctica.

- Ajustar espectrofotómetro a 0 frente a agua destilada.

- Condiciones del ensayo: 

• Longitud de onda.... 540 nm

• Cubeta.... 1 cm de paso de luz

• Temperatura.... 15-25ºC

- Es muy importante la temperatura, si no es posible obtenerla debemos incubar.
- Para obtener un resultado óptimo, tener en cuenta la edad y el sexo, comprobando los valores de referencia.
- El R.Drabkin se debe eliminar como un residuo tóxico y peligroso en un contenedor adaptado a este tipo de residuos. Debe tener cuidado durante su manipulación.

CONCLUSIONES:

Esta práctica nos resulta útil para poder determinar el volumen de hemoglobina que hay en la sangre. Los exámenes de laboratorio pueden realizarse por muchas razones, como investigación rutinaria de salud o sospecha de enfermedad o de toxicidad. También pueden ser utilizados para determinar si la efectividad de un medicamento mejora o empeora. Los exámenes pueden medir el éxito o fracaso de un tratamiento. Pueden ser solicitados por razones médicas o legales. 

Si nos hubieran salido unos valores por debajo de los normales: indica anemia que puede obedecer a diferentes causas: anemia primaria, cáncer, embarazo, enfermedades renales o hemorragias. Por encima de los valores normales: puede deberse a cardiopatías, deshidratación o estancia en lugares de gran altitud.