Día de realización de la práctica: 18/10/2019
OBJETIVO:
FUNDAMENTO:
Las tinciones hematológicas se pueden definir como el conjunto de técnicas necesarias para teñir y diferenciar los distintos componentes de la sangre.
Las técnicas en que se basan las tinciones hematológicas hacen uso de colorantes. Éstos interactúan con los componentes celulares dispuestos a modo de frotis sanguíneo sobre un portaobjetos. Los colorantes son sustancias capaces de fijarse selectivamente según su afinidad química.
Los colorantes tipo Romanowsky están formados por Azul de Metileno y sus derivados oxidados, colorantes básicos, y el colorante ácido Rosina.
Los colorantes básicos se unen a los componentes ácidos de las células, ácidos nucleicos, gránulos en basófilos y proteínas ácidas que se tiñen de un color rojo púrpura más o menos intenso.
La Eosina se une a la hemoglobina, a los componentes básicos de las estructuras celulares y a los gránulos de los eosinófilos.
El balance entre el Azul de Metileno y sus derivados oxidados y entre estos y la Rosina, proporciona una tonalidad más o menos azul y una mayor o menor intensidad en la coloración, que son característicos de cada tipo de colorante Giemsa, May- Grünwald o Wright.
UTILIZACIÓN:
Para la tinción de células sanguíneas y de médula ósea.
UTILIZACIÓN:
Para la tinción de células sanguíneas y de médula ósea.
MATERIALES:
- Láminas para la extensión de la sangre
- Cubetas de tinción
- Varillas paralelas
- Pipeta Pasteur
- Cronómetro
- Frasco lavador
- Microscopio
REACTIVOS:
- Colorante de May-Grünwald
- Giemsa diluida al 1:10
- Agua destilada
- Microscopio
1. La extensión preparada, secada al aire y sin fijar, se cubre con un volumen conocido (2 mL aproximadamente) del colorante May-Grünwald que se deja actuar durante 3 minutos.
2. Después, se vierte el colorante, inclinando el portaobjetos y, sin lavar, se cubre con Giemsa recién diluido (1/10) con agua tamponada (pH 7,0-7,2).
3. A los 8-20 minutos, se lava con agua destilada y se deja secar al aire.
RESULTADOS:
10x
40x
100x
Monocitos
Monocitos
Basófilo
Monocito
Basófilo
OBSERVACIONES:
- Con el colorante de May-Grünwald cubrimos completamente el porta.
- Dejamos 10 minutos el colorante Giemsa.
- Se realizó justo después, con otro frotis sanguíneo, la tinción de Wright, para poder compararlos.
- Los tiempos pueden variar en cuestión del lote o maduración del colorante.
ERRORES Y FALLOS:
- No se puede observar del todo bien ya que las células se tiñeron poco.
- No se puede observar del todo bien ya que las células se tiñeron poco.
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