PRÁCTICA 13: DETERMINACIÓN CUANTITATIVA DEL TIEMPO DE TROMBOPLASTINA PARCIAL ACTIVADA (APTT)

OBJETIVO:

Medir cuantitativamente el tiempo transcurrido de una muestra de plasma citratado, hasta la formación del coágulo. 

PRINCIPIO DEL MÉTODO:

Los factores intrínsecos de la coagulación se avivan en presencia de un complejo fosfolipídico y un activador soluble en plasma citratado; se mide el tiempo transcurrido después de la adición del cloruro clásico (CaCl2) hasta la formación del coágulo de fibrina.

SIGNIFICADO CLÍNICO:

La medida del tiempo de APTT, es la determinación más común junto con la PT, sirve para determinar trastornos de la coagulación y es particularmente sensible a los defectos de la coagulación intrínseca (Factores VIII, IX, XI, XII).

Se usa normalmente para la monitorización de las terapias anticoagulantes con heparina.

El diagnóstico clínico debe realizarse teniendo en cuenta todos los datos clínicos y de laboratorio.

MUESTRA:

- Plasma citratado

APARATEJE:

- Coagulómetro

- Baño termostático 

REACTIVOS:

- R1 Activador: Ácido elágico

- R2 Iniciador: Cloruro cálcico

- Opcional Control normal/patológico

MATERIALES:

- Pipeta automática de 100 uL

- Puntas de pipeta amarillas

- Gradilla

- Cubetas de coagulación

PROCEDIMIENTO:

1. Calentar a 37ºC los reactivos y la muestra.

2. Mezclar bien los reactivos sin agitarlos.

3. Colocar en una cubeta el imán.

4. Pipetear en la cubeta:

 - Plasma citratado: 100 uL

 - R1: 100 uL

5. Mezclar bien e incubar exactamente 5 minutos a 37ºC (tiempo de activación).

6. Luego pipetear en la cubeta:

 - R2: 100 uL

7. Mezclar.

8. Poner en marcha el cronómetro o el controlador de tiempo del coagulómetro y medir el tiempo de formación del coágulo, a partir de la adición del R2 Iniciador.

RESULTADO:

Rango: Debe estar entre los valores --> (62.0-71.3 seg)

Muestra: 65 seg