PRÁCTICA 12: DETERMINACIÓN DE COOMBS DIRECTO EN TUBO

OBJETIVO:

Determinar si existen o no anticuerpos irregulares o incompletos fijados en la membrana de los hematíes del paciente enfrentando éstos al reactivo de Coombs específico para ello.

MATERIAL:

- Pipetas automáticas 50 uL/100-1000uL

- Puntas amarillas y azules

- 2 tubos de ensayo de 3 mL

- Gradilla

- Pipetas Pasteur

- Pinzas de metal

APARATAJE:

- Centrífuga

- Visualizador

REACTIVOS:

- AGH y SF.

- Hematíes control sensibilizados con IgG (hematíes reactivos que han sido sensibilizados industrialmente). 

MUESTRA:

- Sangre anticoagulada

PROCEDIMIENTO:

1. Realizar un lavado de los hematíes de la muestra-problema y una dilución al 5%.

2. Depositar de 3 a 4 gotas de AGH en otro tubo pequeño.

3. Situar de 3 a 4 gotas de suspensión de hematíes de la muestra-problema en el tubo junto a la AGH y agitar suavemente.

4. Centrifugar a 2.500 rpm durante 1 minuto.

5. Resuspender el sedimento de hematíes dando pequeños golpecitos en el fondo del tubo.

6. Observar la presencia o ausencia de aglutinación en el visualizador, y si es necesario, en el microscopio.

RESULTADOS:

Observación macroscópica de la aglutinación:

Ausencia de aglutinación (-): los hematíes permanecen en forma de suspensión homogénea de color rojizo.

OBSERVACIONES:

- En el paso 1º echar 1000 uL de SF y 50 uL de sangre.

- En el paso 1º lavar 3 veces.

- En la dilución al 5% echar 500 uL de SF tras centrifugar.