PRÁCTICA 11: DETERMINACIÓN DE COOMBS INDIRECTO

OBJETIVO:

Investigar la presencia de anticuerpos irregulares o incompletos en el suero del paciente enfrentándolos, primeramente, a hematíes específicos tipados y, posteriormente, a la AGH para su detección.

APARATAJE:

- Baño termostático

- Centrífuga

MATERIAL:

- Material para el lavado y la dilución de los hematíes

- Tubos de ensayo 3 mL

- Gradilla

- Pipeta Pasteur y visualizador

REACTIVOS:

- AGH y SF

- Hematíes tipados del grupo O+

MUESTRA:

- Suero problema

PROCEDIMIENTO:

1. Preparación de los hematíes tipados O+

1. Realizar una determinación de grupo celular sobre los hematíes tipados O+ para comprobarlo.

2. Efectuar un lavado y una dilución de los hematíes tipados O+ al 5%.

3. Realizar la prueba de Coombs directa sobre los hematíes tipados O+ para comprobar que no existen anticuerpos irregulares sobre ellos.

2. Determinación de Coombs indirecto

1. En un tubo de hemólisis depositar 2 a 3 gotas del suero problema.

2. Añadir al tubo unas 2 o 3 gotas de la suspensión de hematíes tipados O+ al 5% y agitar suavemente.

3. Incubar la mezcla en un baño termostático durante 15-30 min.

4. Lavar la mezcla con 1 ml de SF.

5. Repetir este lavado 2 veces más.

6. Al sedimento obtenido con el último lavado añadir 2 o 3 gotas de AGH.

7. Centrifugar a 2.500 rmp durante 1 min.

8. Resuspender el sedimento obtenido con el ultimo lavado dando pequeños golpecitos en el fondo del tubo; si es necesario, añadir unas gotas de SF.

9. Observar la presencia o ausencia de aglutinación en el visualizador, y si es necesario, en el microscopio.

RESULTADOS:

Se observa la presencia de aglutinación: aparecen grumos rojos oscuros que flotan en el líquido.