PRÁCTICA 6: TINCIÓN CON COLORANTE WRIGHT

Día de realización de la práctica: 18/10/2019

OBJETIVOS:

Aprender a realizar, de forma correcta, la tinción de Wright.

FUNDAMENTO:

Los colorantes tipo Romanowsky están formados por Azul de Metileno y sus derivados oxidados, colorantes básicos, y el colorante ácido Rosina. 

Los colorantes básicos se unen a los componentes ácidos de las células, ácidos nucleicos, gránulos en basófilos y proteínas ácidas que se tiñen de un color rojo púrpura más o menos intenso.

La Eosina se une a la hemoglobina, a los componentes básicos de las estructuras celulares y a los gránulos de los eosinófilos.

El balance entre el Azul de Metileno y sus derivados oxidados y entre estos y la Rosina, proporciona una tonalidad más o menos azul y una mayor o menor intensidad en la coloración, que son característicos de cada tipo de colorante Giemsa, May- Grünwald o Wright.

UTILIZACIÓN: 

Para la tinción de células sanguíneas y de médula ósea.

MATERIALES:

- Frotis sanguíneo

- Cubeta para tinción

- Varillas paralelas

- Frasco lavador

- Pipeta Pasteur

- Cronómetro

REACTIVOS:

- Colorante de Wright

- Agua destilada

APARATOS Y EQUIPOS:
- Microscopio

PROCEDIMIENTO:

1. La extensión, secada al aire y sin fijar, se cubre totalmente con un volumen conocido de colorante (1 mL aproximadamente) que se deja actuar durante 5 minutos.

2. Posteriormente, se añade, gota a gota, igual volumen de agua tamponada (pH 6,8) soplando ligeramente con la pipeta para conseguir una mezcla homogénea.

3. Después de 5 minutos se vierte el colorante, se lava con agua tamponada (pH 6,8) y se deja secar al aire.

RESULTADOS:

10x

40x

100x

Neutrófilos, monocito

Neutrófilo

Eosinófilo

Basófilo

Neutrófilo

Eosinófilo

Neutrófilos

Neutrófilos y basófilo

Linfocito

Plaquetas y neutrófilos

OBSERVACIONES:
- Se hizo justo después de una tinción de May-Grünwald.
- La tinción de Wright obtuvo mejores resultados en general.
- Es bastante más rápida  y sencilla que la tinción de May-Grünwald.

ERRORES Y FALLOS:
- Algunos microscopios no enfocaban del todo bien.

PRÁCTICA 5: TINCIÓN CON COLORANTE MAY-GRÜNWALD

Día de realización de la práctica: 18/10/2019

OBJETIVO:

Realizar una tinción de May-Grünwald sobre un frotis sanguíneo.

FUNDAMENTO:
Las tinciones hematológicas se pueden definir como el conjunto de técnicas necesarias para teñir y diferenciar los distintos componentes de la sangre. 

Las técnicas en que se basan las tinciones hematológicas hacen uso de colorantes. Éstos interactúan con los componentes celulares dispuestos a modo de frotis sanguíneo sobre un portaobjetos. Los colorantes son sustancias capaces de fijarse selectivamente según su afinidad química.

Los colorantes tipo Romanowsky están formados por Azul de Metileno y sus derivados oxidados, colorantes básicos, y el colorante ácido Rosina. 

Los colorantes básicos se unen a los componentes ácidos de las células, ácidos nucleicos, gránulos en basófilos y proteínas ácidas que se tiñen de un color rojo púrpura más o menos intenso.

La Eosina se une a la hemoglobina, a los componentes básicos de las estructuras celulares y a los gránulos de los eosinófilos.

El balance entre el Azul de Metileno y sus derivados oxidados y entre estos y la Rosina, proporciona una tonalidad más o menos azul y una mayor o menor intensidad en la coloración, que son característicos de cada tipo de colorante Giemsa, May- Grünwald o Wright.

UTILIZACIÓN:
Para la tinción de células sanguíneas y de médula ósea.

MATERIALES:

- Láminas para la extensión de la sangre

- Cubetas de tinción

- Varillas paralelas

- Pipeta Pasteur

- Cronómetro

- Frasco lavador 

- Microscopio 

REACTIVOS:

- Colorante de May-Grünwald 

- Giemsa diluida al 1:10

- Agua destilada

APARATOS Y EQUIPOS:
- Microscopio 

PROCEDIMIENTO:
1. La extensión preparada, secada al aire y sin fijar, se cubre con un volumen conocido (2 mL aproximadamente) del colorante May-Grünwald que se deja actuar durante 3 minutos.

2. Después, se vierte el colorante, inclinando el portaobjetos y, sin lavar, se cubre con Giemsa recién diluido (1/10) con agua tamponada (pH 7,0-7,2).

3. A los 8-20 minutos, se lava con agua destilada y se deja secar al aire.

RESULTADOS:

10x

40x

100x

Monocitos

Monocitos

Basófilo

Monocito

Basófilo

OBSERVACIONES:

- Con el colorante de May-Grünwald cubrimos completamente el porta. 

- Dejamos 10 minutos el colorante Giemsa.

- Se realizó justo después, con otro frotis sanguíneo, la tinción de Wright, para poder compararlos.

- Los tiempos pueden variar en cuestión del lote o maduración del colorante.

ERRORES Y FALLOS:
- No se puede observar del todo bien ya que las células se tiñeron poco.

PRÁCTICA 4: TINCIÓN PANÓPTICO RÁPIDO

OBJETIVO:
Aprender a realizar la tinción de panóptico rápido.

FUNDAMENTO:
La técnica de la tinción de panóptico rápido permite una preparación rápida de frotis sanguíneos teñidos mediante un uso sucesivo de tres soluciones o colorantes. 
Consigue menos resolución de las estructuras celulares que la tinción de May-Grünwald-Giemsa y la tinción de Wright. Pero su elaboración es más rápida y más sencilla. 

MATERIALES Y REACTIVOS:
- Un frotis con sangre humana
- Tres cubetas de Wertheim

- Agua destilada

- Pinzas
- Solución 1: Metanol (fijador)

- Solución 2: Santeño (ácido)

- Solución 3: Tiacina (básico)

PROCEDIMIENTO:
1. Se dejan secar las extensiones a temperatura ambiente.
2. Se colocan las 3 soluciones en las cubetas de Wertheim, una para cada solución.
3. Cogemos los portas con las pinzas y los sumergimos 5 veces durante unos segundos, en la solución 1, se escurre, y se procede a hacer lo mismo con las soluciones 2 y 3.
4. Se lavan con agua destilada y se dejan secar sobre el papel secante para que absorba el exceso de agua.
5. Cuando esté totalmente seco procederemos a su observación.

RESULTADOS:
Un frotis sanguíneo teñido por la técnica de panóptico rápido.

10x

40x

100x

Se pueden ver neutrófilos y hematíes

Se puede ver en la parte superior neutrófilos y en la parte inferior un granulocito basófilo

Neutrófilos

Monocito

OBSERVACIONES:
- Utilizar pinzas que sujeten bien el porta.
- Se debe escurrir bien el porta entre las distintas inmersiones.
- Es la mejor tinción de todas donde se podían observar las células sanguíneas.

ERRORES Y FALLOS:
- No utilizar pinzas para sujetar el porta.