Kit de reactivos citoquímicos para diagnóstico de la leucemia
El presente kit de “LEUCOGNOST® POX - Detección de la reacción de la peroxidasa en leucocitos” es utilizado para el diagnóstico celular en la medicina humana, se emplea en el examen hematológico y citológico de muestras de origen humano. Se trata de un kit de tinción que, junto con otros materiales de diagnóstico in vitro pertenecientes a nuestra cartera, hace evaluables determinadas para el diagnóstico estructuras de destino (mediante fijación, tinción, dado el caso contratinción, montaje) en material de examen hematológico y clínico-citológico, como p.ej. frotis de sangre total y de médula ósea.
El presente kit de tinción está previsto para la reacción en la cubeta de 60 ml de Hellendahl y contiene todos los reactivos necesarios para detección de la reacción de la peroxidasa en leucocitos.
PRINCIPIO:
La reacción de peroxidasa, en particular la reacción citoquimicamente signifi- cativa de mieloperoxidasa, sirve de indicador para la presencia de elementos celulares mieloicos. El grado de madurez de los granulocitos en maduración puede ser estimado esencialmente según la intensidad de la reacción cromática pardo-negruzca.
Las peroxidasas son catalasas lisosomales que transfieren el hidrógeno desde un donador adecuado (anteriormente la bencidina cangerígena, aqui: 4-cloro- 1-naftol) a un peróxido (aquí: peróxido de hidrógeno). Entonces el donador 4-cloro-1-naftol se oxida y se transforma en un colorante insoluble pardo negruzco, que puede utilizarse corno indicador de la correspondiente actividad de peroxidasas.
MATERIAL:
- Frotis frescos de sangre
- Alcohol 96º
- Papel
- Portaobjetos
- Lanceta
- Pipeta Pasteur
- Pinzas
REACTIVOS:
El kit contiene 14 frescos
- R1: 4-Cloro-1-naftol
- R2: Tris (hidroximetil) aminometano HCl solución tampón
- R3: Solución de peróxido de hidrógeno
PREPARACIÓN DE LAS MUESTRAS:
Se necesitan frotis sanguíneos finos, secados al aires y guardados como máximo durante 3 días.
Los frotis han de ser secados al aire durante 30 minutos como mínimo, debiéndose fijar éstos antes de la reacción citoquímica propiamente dicha según las correspondientes prescripciones.
Después de la fijación los frotis podrán ser almacenados hasta 3 días en el frigorífico.
Todas las muestras deben tratarse de acuerdo con el estado de la tecnología. Todas las muestras deben estar rotuladas inequívocamente.
PREPARACIÓN DE REACTIVOS:
Preparación de solución de tinción
Utilizar solamente soluciones recién preparadas
Para preparar aprox. 60 ml de solución se añaden juntos:
La solución de tinción preparada es incolora y utilizable durante 3 horas.
TÉCNICA:
Los portaobjetos han de ser inmersos y movidos brevemente en las soluciones, la simple introducción proporcionará resultados de tinción insuficientes.
Los portaobjetos deberían ser escurridos bien por goteo después de los diferentes pasos de tinción, de esta manera se podrá evitar el innecesario arrastre de soluciones.
Para el almacenamiento de preparados hematológicos durante varios meses se recomienda el montaje con un medio de montaje acuoso (p.ej. Aquatex®) y un cubreobjetos. Sin montaje, la tinción tendrá una estabilidad de unos 3 días; si se cubre con aceite de inmersión, la estabilidad será de sólo unas horas.
Para el análisis de preparados teñidos con un aumento microscópico >40x se recomienda el uso de aceite de inmersión.
RESULTADO:
Los neutrófilos y eosinófilos son peroxidasa-positivas, se ven claramente gránulos con tinción pardo-negruzca.
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