PRÁCTICA 20: DETERMINACIÓN DEL PORCENTAJE DE RETICULOCITOS

OBJETIVOS:

- Determinar el RET por un número determinado de hematíes.

- Calcular el número de reticulocitos existentes por volumen de sangre.

- Valorar el RET, el número absoluto de reticulocitos y de la actividad eritropoyética.

FUNDAMENTO: 

Los reticulocitos son eritrocitos inmaduros que contienen restos de ARN ribosomial, el cual se tiñe por determinados colorantes llamados ``vitales´, precipitando y observando unos filamentos o citoplasmáticos que no poseen los hematíes. Según el grado de maduración presentan más o menos filamentos, de forma que a más maduros menos filamentos.

Esta práctica se realiza para saber el porcentaje % de reticulocitos que hay circulantes en sangre.

Los reticulocitos son las células de la última línea de la eritropoyesis de los hematíes.

MATERIAL:

- Gradilla

- Tubo de ensayo

- Lanceta

- Toallita con alcohol

- Papel parafilm

- Tres pipetas Pasteur desechables 

- Dos portaobjetos

- Microscopio y aceite de inmersión

REACTIVOS:

- Colorante de azul de cresil brillante preparado de la siguiente manera:

 - 1 volumen de citrato sódico (20 mL)

 - 4 volúmenes de solución salina (9g/1 de ClNa, suero fisiológico, 80 mL)

 - 1 g de azul de cresil brillante

- Disolver el colorante en a mezcla anterior, guardarlo en una botella de cristal topacio para que no se vea afectado por La Luz, y filtrarlo antes de usarlo. Generalmente, las marcas comerciales ya suministran el colorante preparado para su uso.

MUESTRA:

- Sangre anticuoagulada 

PROCEDIMIENTO:

1. Colocar en un tubo pequeño 3 gotas de solución de colorante con una Pipeta Pasteur. 

2. Añadir 3 gotas de muestra sanguínea con la ayuda de una Pipeta Pasteur.

3. La mezcla siempre debe ser proporcional 1:1 (la misma cantidad de colorante que de muestra).

4. Tapar el tubo donde se ha realizado la mezcla con parafilm.

5. Mezclar agitando suavemente para que los eritrocitos absorban bien el colorante.

6. Dejar en reposo a temperatura ambiente unos 20 minutos.

7. Pasado este tiempo, volver a homogeneizar la suspensión.

8. Destapar el tubo; con una gota de la mezcla, efectuar una extensión sobre el portaobjetos.

9. Dejar secar la extensión al aire.

10. Colocar la extensión ya bien seca sobre la platina del microscopio.

11. Con el objetivo de 40x localizar una zona de la extensión en que los hematíes se observen bien separados.

12. Pasar al objetivo de 100x y ajustar la luminosidad para observar bien las células.

13. Hacer un recorrido de diferentes campos sobre la extensión en forma de almena hasta llegar a observar varios reticulocitos.

RESULTADO:

En esta imagen podemos observar claramente un reticulocito. Este campo está observado con el objetivo de 100x.

Campos - Hematíes contados - Reticulocitos observados

    1                    260                                    3
    2                    230                                    2
TOTAL               490                                    6
Se observaron dos campos, contando todos los hematíes presentes en él. En total se contabilizaron 490 hematíes, de los cuales 6 fueron identificados como reticulocitos.

Con los datos anteriores, calculamos el porcentaje:

(6/490) x 100 = 1,22%

Los valores son normales. Entre 1% y 1,9% normal. Si sobrepasa el 2%, implicaría existencia de una reticulocitosis típica de una anemia regenerativa. Si el valor se encuentra inferior al 0,5% implica la existencia de una reticulopenia típica de una anemia arregenerativa.