PRÁCTICA 21: DETERMINACIÓN CUANTITATIVA DE HIERRO

OBJETIVO:

Determinar de forma cuantitativa la cantidad de hierro presente en la muestra.

PRINCIPIO DEL METODO:

El hierro se disocia del complejo sérico hierro-transferrina en medio ácido débil. El hierro libre se reduce a ión ferroso mediante el ácido ascórbico. Los iones ferrosos en presencia de FerroZine forma un complejo coloreado:

La intensidad del color formado es proporcional a la concentración de hierro en la muestra ensayada.

SIGNIFICADO CLINICO:

El hierro es el constituyente de un gran número de enzimas. La mioglobina, proteína muscular, contiene hierro, así como el hígado.
El hierro es necesario para la producción de hemoglobina, molécula que transporta el oxígeno en el interior de los glóbulos rojos. Su déficit causa anemia ferropénica. Se encuentran niveles elevados de hierro en la hemocromatosis, cirrosis, hepatitis aguda y en concentraciones altas de transferrina. La variación día a día es común en poblaciones sanas.
Estabilidad: 3 meses a 2-8ºC o 1 mes a temperatura ambiente (15-25ºC).
El diagnostico clínico debe realizarse teniendo en cuenta todos los datos clínicos y de laboratorio.

REACTIVOS:

PREPARACIÓN:

Reactivo de trabajo (RT): 

- Ref: 1001247. Disolver (-->) el contenido de un tubo de R2 Reductor en un frasco de R1 Tampón.

Tapar y mezclar suavemente hasta disolver su contenido.

MATERIAL:

- Gradilla

- Cuatro tubos de ensayo 

- Pipeta automática de 100-1000 uL y de 20-200 uL

- Puntas amarillas y azules
- Espectrofotómetro

MUESTRA:

- Plasma heparinizado

PROCEDIMIENTO:

1. Condiciones del ensayo: 

Longitud de onda:562nm (530-590) 

Cubeta: 1cm paso de luz 

Temperatura: 37ºC / 15- 25ºC

2. Ajustar el espectrofotómetro a cero frente a agua destilada.

3. Pipetear en una cubeta:

4. Mezclar e incubar 5 min a 37ºC o 10 min a temperatura ambiente.

5. Leer las absorbancias (A) del Patrón y la muestra frente al Blanco de reactivo. El color es estable como mínimo 30 minutos.

RESULTADO:

((A) Muestra - (A) Blanco de muestra - (A) Blanco de reactivo / (A) Patrón - (A) Blanco de reactivo) x 100 (Concentración Patrón)

(A) Patrón: 0,094

(A) Muestra: 0,141 

(0,141/0,094) x 100 = 150 μg/dL

Al tratarse de la muestra de una mujer, se encontraría dentro de los valores de normalidad.

Valor de referencia mujer: 40-150 μg/dL